PCR, lossis cov tshuaj tiv thaiv kab mob polymerase, yog cov txheej txheem kuaj mob uas tau siv dav hauv tshuaj thiab lwm yam kev tshawb fawb. Kev kuaj PCR ib zaug tau dhau los ua qhov kev tshawb fawb tiag tiag.
Kev piav qhia
Quantitative PCR yog hom PCR tiag tiag.
Qhov no tau nkag siab tias yog qhov sib txawv ntawm PCR, uas cov kinetics ntawm cov tshuaj tiv thaiv tau sau tseg tas li, uas ua rau nws muaj peev xwm los ntsuas cov ntsiab lus ntawm cov DNA tshwj xeeb nucleotide sequences nyob rau hauv ib tug complex molecular sib tov.
Quantitative PCR txoj kev yuav tham nyob rau hauv ntau yam hauv qab no.
Lub ntsiab lus ntawm kev tshuaj ntsuam
Kev coj noj coj ua thiab kev ua haujlwm serological tshwj xeeb yog siv los kuaj kab mob. Hauv thawj zaug, cov tshuaj tiv thaiv kab mob rau cov kab mob sib kis hauv cov ntshav tau txiav txim siab. Hauv qhov thib ob, cov khoom siv roj ntsha uas tau muab los ntawm tus neeg mob yog siv los sow ib qho nruab nrab uas yog qhov zoo rau kev loj hlob ntawm cov kab mob kab mob. Diagnostics nyob rau hauv ob qho tib sirooj plaub yuav kawg hnub los yog lis piam.
Kev kuaj PCR tuaj yeem ua nrog cov khoom siv lom neeg sib txawv uas tau txais los ntawm tus neeg mob. Ntshav thiab lwm yam pathological, physiological thiab biological media thiab kua ua raws li cov qauv. Koj tuaj yeem ua PCR quav lossis tso zis.
Cov kab mob kis kab mob thiab kis kab mob feem ntau raug kuaj pom los ntawm PCR ntau, vim tias lawv yuav tsis yooj yim rau kev kuaj mob vim yog qhov tshwj xeeb ntawm cov txheej txheem pathological tshwm sim los ntawm lawv. Txhawm rau txiav txim siab cov kab mob no, nws yuav siv sijhawm, thaum lub sijhawm cov tshuaj tiv thaiv pib tsim hauv lub cev, txiav txim siab los ntawm cov txheej txheem serological. Tab sis qhov no tsis tuaj yeem lees txais hauv qee kis.
Txoj kev ua tiav
PCR method - kuaj kuaj pom tus kab mob hauv cov qauv cais tawm ntawm tus neeg mob (hauv vitro).
Txhawm rau ua cov tshuaj tiv thaiv kab mob polymerase, yuav tsum muaj cov tshuaj tshwj xeeb.
Cov khoom siv kuaj tau nkag rau hauv cov raj kuaj nrog cov tshuaj reagents. Cov raj kuaj tau muab tso rau hauv ib lub cuab yeej tshwj xeeb - PCR amplifier, uas yog tsim los ua kom nrov nrov (nce tus naj npawb) ntawm qhov xav tau RNA lossis DNA tawg, PCR amplifier ua haujlwm hauv hom cyclic. Nyob rau hauv ib lub voj voog, yog tias cov qauv muaj RNA lossis DNA sib lawv liag ntawm cov kab mob, tom qab ntawd ntau thiab ntau cov ntawv luam ntawm cov khoom ntawm cov nucleic acids sib sau ua ke hauv cov tshuaj. Koj tuaj yeem txiav txim siab qhov muaj tus kab mob, thiab nws cov nyiaj hauv cov qauv.
Type of PCR
Kev tshuaj xyuas zoo los ntawm PCR tso cai rau koj kom tau txais cov txiaj ntsig hauv qab no:
- negative thaum tsis pom cov kab mob txaus siab hauv cov qauv;
- zoo yog tias muaj cov kab ke pom hauv cov qauv uas yog tus yam ntxwv ntawm tus kab mob tshwj xeeb.
Nrog rau qhov txiaj ntsig PCR zoo, peb tuaj yeem hais nrog 95% qhov tseeb txog qhov muaj tus kab mob kuaj pom. Nyob rau tib lub sijhawm, qhov tseeb ntawm PCR teeb siv rau kev kuaj mob nce mus txog 100%.
Feem ntau 5% ntawm cov txiaj ntsig tsis raug yog txiav txim los ntawm tib neeg. Piv txwv li, kev ua txhaum ntawm cov txheej txheem ntawm kev tshuaj xyuas thiab khaws cia cov tshuaj reagents tuaj yeem txo qhov raug ntawm txoj kev tshawb no.
Quantitative PCR txhais lub tswvyim ntawm kev kis kab mob. Nws tuaj yeem txiav txim siab seb muaj pes tsawg tus kab mob DNA nyob hauv cov qauv coj los ntawm tus neeg mob.
Qhov mob hnyav ntawm tus kab mob yog ncaj qha rau qhov nce ntawm lawv tus lej. Koj tuaj yeem txiav txim siab qhov ua tiav ntawm kev kho kom txo tau tus kab mob.
Xa rau PCR biomaterial
Quantitative PCR yog nqa tawm hauv tsev kho mob, feem ntau yog thaum sawv ntxov. Thaum mus ntsib kws kho mob, tus neeg mob yuav tau qhia tias yuav tsum tau noj dab tsi: khawb, smears, tso zis lossis ntshav. PCR tuaj yeem kuaj xyuas cov kab mob tsis hais seb qhov kev sib kis ntawm cov khoom siv li cas.
Rau qhov kev soj ntsuam zoo, hauv kev xav, tsuas yog muaj ib qho kab mob hauv cov qauv yuav tsum tau ua. Hauv kev xyaum, lawv sim tsim kom muaj txiaj ntsig zoo dua. Muaj qee qhov lus pom zoo rau qhov no:
- yog tias lawv muab khawb los yog swab ntawm qhov chaw moslub cev, koj yuav tsum tsis txhob muaj kev sib raug zoo nrog peb hnub ua ntej kev kawm;
- koj tsis tuaj yeem douche nrog tshuaj tua kab mob lossis ntxuav koj tus kheej ua ntej kev tshuaj ntsuam;
- peb teev ua ntej noj smear los ntawm qhov tso zis, koj yuav tsum ua siab ntev thiab tsis txhob tso koj cov hnyuv.
Tsis txhob ua raws li cov cai no thaum pub ntshav.
Cov txiaj ntsig ntawm kev txheeb xyuas PCR ntau npaum li cas txhais tau li cas?
Kev ntsuas ntau ntawm cov txiaj ntsig tau
Nyob rau hauv ntau qhov xwm txheej, qhov teeb meem ntawm kev ua tau zoo ntawm kev kho mob thiab / lossis cov txheej txheem pathology tshwm sim. Cov lus nug no yog qhov tshwj xeeb tshaj yog thaum kuaj cov neeg muaj kab mob ntev (tus kab mob tiv thaiv kab mob tib neeg, kab mob siab B thiab C). Thaum kuaj xyuas, lawv tau ua raws li qhov tseeb tias qhov sib xyaw ntawm amplicons (PCR cov khoom) yog proportional rau qhov muaj cov ntawv luam ntawm cov noob xav tau hauv cov qauv tshuaj ntsuam.
Tau kawg, suav nrog cov txiaj ntsig ntawm PCR ntau npaum li cas yog ua los ntawm gel electrophoresis nrog kev kawm ntawm kev siv ntawm PCR tshwj xeeb cov cim. Tsis tas li ntawd, qhov yuav tsum tau ua ua ntej rau kev ntsuas kom muaj nuj nqis ntawm cov txiaj ntsig tau txais yog cov qauv kev tswj xyuas zoo uas muaj cov lej paub txog cov noob uas xav tau (piv txwv li, ib txhiab daim ntawv theej ntawm kab mob siab C gene rau ib qho tshuaj tiv thaiv PCR). Ob peb qhov kev sib txuas ntawm kev tswj kom muaj nuj nqis tso cai rau kev ntsuas qhov nkhaus kom tsim tau thiab siv los ntsuas cov ntsiab lus ntawm cov tshuaj genocopies hauv cov qauv kuaj mob.
Nyob rau hauv lub ntsiab lus ntawm ntau PCR, qhov kev ua tiav tseem ceeb tau tsimfluorescent DNA sojntsuam uas tau ntxiv rau cov tshuaj tiv thaiv sib xyaw ua ke nrog cov primers yooj yim thiab tso cai rau koj taug qab cov txheej txheem PCR hauv lub sijhawm, uas yog, lub sijhawm PCR.
Txoj kev TaqMan yog hais txog kev sib txuas ntawm fluorescent DNA sojntsuam uas tshwj xeeb rau nruab nrab ntawm lub amplicon thiab muaj ob daim ntawv lo ntawm qhov kawg. Ib tug ntawm lawv yog daim ntawv lo fluorescent, qhov thib ob yog lub quencher molecule rau cov fluorescence no.
Ib yam khoom tshwj xeeb, uas yog hybrid ntawm fluorimeter thiab lub thermoblock-amplifier, ua qhov ntsuas qhov ntsuas tsis tu ncua ntawm fluorescence hauv txhua lub raj ntsuas (lub sijhawm PCR txoj cai). Tom qab 20-40 lub voj voog ntawm PCR, tus kheej nkhaus yuav tau txais rau txhua tus qauv. Tus naj npawb ntawm cov ntawv luam ntawm cov noob xav tau uas muaj nyob rau hauv cov qauv ntsuas tuaj yeem suav los ntawm kev ntsuas qhov nkhaus nrog cov qauv tswj.
Tsis tas li, ib qho tseem ceeb ntawm kev siv PCR los ntawm txoj kev fluorescent yog tias tsis tas yuav qhib cov hlab nrog PCR sib tov thaum coj mus rau hauv tus account cov txiaj ntsig. Qhov no txo qhov muaj peev xwm ntawm chav sib kis nrog cov khoom lag luam amplification, thiab tsis tas yuav faib cov chaw ua haujlwm tshwj xeeb rau electrophoresis.
Daim ntawv teev cov PCR ntau npaum li cas?
nrhiav tau dab tsi?
Los ntawm ib txoj hauv kev xws li PCR ntau, kev hloov pauv hauv cov noob tau pom: kev ntxig, tshem tawm thiab qhov hloov pauv. Tab sis nrog qee yam kev mob tshwm sim, cov tsos mob tshwm sim tshwm sim hauv cov lus teb rau kev hloov pauv hauv cov ntsiab lus ntawm qee cov noob.
ua tsaugKev txheeb xyuas qhov ntau muab cov txiaj ntsig ntawm tus lej, feem ntau hauv IU / ml. Qhov no txhais tau hais tias nyob rau hauv ib milliliter ntawm cov qauv kuaj, ib co ntawm cov luam ntawm RNA los yog DNA ntawm cov kab mob, ntsuas nyob rau hauv lub thoob ntiaj teb units, twb pom.
Nyob ntawm qhov loj, qhov hnyav ntawm tus kab mob raug kuaj pom. Ntshav feem ntau yog kuaj los txiav txim siab kis kab mob, vim cov kab mob txav mus los hauv cov ntshav thaum muaj mob.
Ntse
Quantitative PCR hauv kev kuaj ntshav muaj ob yam.
- Kev tshuaj xyuas yog ua nyob rau hauv lub xub ntiag ntawm primers los yog deoxyribonucleoside triphosphates, uas tau sau nrog fluorescent lossis radioactive daim ntawv lo kom raug txiav txim siab cov ntsiab lus ntawm cov khoom tsim PCR.
- Nyob hauv cov txheej txheem PCR, xaus cov tshuaj tiv thaiv ntxov ua ntej ntau cov khoom PCR tshwm sim. Qhov no yog vim lub fact tias nyob rau hauv lub kawg theem ntawm saturation, thaum muaj ntau ntawm PCR cov khoom, ob qho tib si enzyme nws tus kheej thiab cov substrates ua raws li qhov txwv kev sib txuas ntawm cov tshuaj tiv thaiv no. Qhov kawg ntawm lub voj voog PCR tom ntej nyob rau hauv cov xwm txheej zoo li no tsis muaj qhov tshwm sim los ntawm kev ua ob npaug ntawm cov khoom PCR, qhov tsis txaus ntseeg ntawm qhov sib txawv ntawm cov qauv sib txawv yog qib, uas tau hais meej meej nyob rau theem pib tom qab dhau los ntawm cov txheej txheem tshuaj tiv thaiv..
Tus nqi ntawm PCR kuaj mob
PCR kev tshawb fawb muaj tus nqi, uas nyob ntawm seb hom kab mob twg yuav raug kuaj, ntawm cov txheej txheem tshuaj xyuas thiab cov khoom siv kuaj. Txhawm rau txiav txim siab ib tus kab mob, koj yuav tsum muab tso rau hauv200-800 rubles. Tus nqi rau noj biomaterial kuj ntxiv - kwv yees li 400 rubles.
